产品简介
RNase R (Ribonuclease R)是一种来源于大肠杆菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶，可从3’-5’方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化几乎所有的线性RNA分子，但不易消化环形RNA、套索结构或3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子。RNase R常用于基因表达和可变剪切研究，可消化线性RNA以使环形RNA (circRNAs)或套索结构RNA (lariat RNA)得到富集。
产品规格
货号
| 试剂
| 规格
| 保存条件
|
R0301
| RNase R(20U/μL)
| 500 U
| -20℃
|
10X Reaction Buffer
| 1 mL
|
产品组分
Storage Buffer | 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton® X-100, 50% Glycerol |
10X Reaction Buffer | 200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2 |
单位定义 标准反应体系下，于 37℃，10 min 将 1 μg poly(A)转化成酸溶核苷酸所需的酶量定义为一个活力单位(U)。
反应体系
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。
注：1）RNase R 在 0.1-0.5 mM Mg2+存在时活性最高，反应中 EDTA 可能降低 RNase R 活性，此时可额外添加 MgCl2 使 Mg2+ 浓度最高达到 0.5 mM。2）孵育后可于 70℃，10 min 使酶失活，再进行下游实验（如逆转录）；也可不灭活，直接纯化后进行下游实验。
质量控制
SDS-PAGE 检测纯度>99%；Total RNA 经 RNase R 消化后进行 RT-qPCR 检测，线性 RNA 丰度明显降低， 环形RNA 丰度基本不变。
性能比较-RNA电泳检测
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后直接进行电泳检测，结果显示RNase R+组28/18/5S条带变淡（不可见），表明RNase R对total RNA的消化作用。吉赛和公司e或公司a的RNase R对total RNA消化效果相当。
性能比较-RT-qPCR检测
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后进行RT-qPCR实验，结果显示RNase R+组β-actin和FGFR2的丰度都明显降低，表明RNase R可消化线性RNA。吉赛和公司e的RNase R对线性RNA消化效果相当，优于公司a的RNase R。
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后进行RT-qPCR实验，结果显示RNase R+ 组中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的丰度基本不变，表明环形RNA耐受RNase R的消化。吉赛和公司e或公司a的RNase R效果相当。
注：数据计算以“RNase R+吉赛”组为对照，设定其相对丰度值为1。
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