细胞运动（transwell、划痕、EMT标志物）

1.Transwell实验

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

Transwell小室可用于细胞迁移和侵袭实验。将Transwell小室放入培养板中，上室种细胞，下室加入血清或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室迁移，计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。

与迁移实验不同的是，侵袭实验是在上室铺上一层基质胶模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，需要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜，可反映细胞的侵袭能力。

实验流程

2. 细胞划痕实验（Wound-Healing Assay）

划痕实验是测定细胞迁移和修复能力的方法，体外培养皿或培养板生长的单层贴壁细胞，用微量枪头或尖锐硬物在细胞生长中央区域划线，并去除中央部分细胞，设定不同时间期限，取出细胞培养板，观察周边细胞是否发生迁移（修复）至中央划痕区，根据细胞的迁移和运动，来判断细胞的迁移和修复能力。

案例展示（HT1080）

3. 上皮-间质转化（EMT）

EMT，全称epithelial–mesenchymal transition，是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程。在胚胎发育、慢性炎症、组织重建、癌症转移和多种纤维化疾病中发挥了重要作用，其主要的特征有细胞黏附分子(如E-钙黏蛋白)表达的减少、细胞角蛋白细胞骨架转化为波形蛋白（Vimentin）为主的细胞骨架及形态上具有间充质细胞的特征等。通过EMT，上皮细胞失去了细胞极性，失去与基底膜的连接等上皮表型，获得了较高的迁移与侵袭、抗凋亡和降解细胞外基质的能力等间质表型。EMT是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。

通过Western Blot的方法检测细胞中目的基因敲减或过表达后EMT marker蛋白表达量，可判断目的基因表达变化后是否能抑制EMT过程的发生，从而判断该基因是否为转移相关基因。

WB检测EMT关键蛋白：

Vimentin、N-Cadherin、Claudin-1、β-Catenin、ZO-1、Snail、Slug、ZEB1、

E-Cadherin

EMT相关蛋白表达变化