RNA pull-down

先将RNA进行标记（如生物素探针标记），再与细胞裂解液共同孵育，从而形成RNA-蛋白质复合物，之后再分离复合物得到蛋白质，通过western blot 或mass Spectrometry检测蛋白质的技术。目前RNA pull-down技术已成为研究miRNA、lncRNA与相互作用蛋白的主要技术手段之一。

实验流程

案例展示

案例 1. RNA pull down检测lncRNA与蛋白质相互作用
近年来，大量的研究表明长链非编码RNA（LncRNA）与多种cancer的发生息息相关，这篇文章中作者研究了在非小细胞肺ai（NSCLCs）中起重要调控作用的lncRNA-linc00630。作者通过RNA pull down等实验发现，linc00630主要通过结合组蛋白去乙酰化酶I（HDAC1）以及DEAD-box解旋酶23（DDX23）来发挥其功能机制。

图1. 长链非编码RNA-Linc00630表达验证及功能表征

案例2. RNA pull down检测circRNA与蛋白质相互作用
环状RNA是近年来受到关注一类非编码RNA，目前主要认为环状RNA通过miRNA海绵机制调控基因表达，但是对于其更全 面的分子功能知之甚少。这篇文章中作者发现在不同cancer细胞中circ-Foxo3持续少量表达，而在cancer细胞凋亡的过程中，circ-Foxo3表达量明显增加。circ-Foxo3可以促进MDM2介导p53进入素化途径降解，使p53含量下降，同时circ-Foxo3又可以通过阻止MDM2介导Foxo3泛素化而提高Foxo3的表达量。

图2. circ-Foxo3 cancer细胞中表达情况